Human Papillomavirus Positivity and Frequency of Genotypes in Servical Samples of Women Living in Sivas Region
1Sivas Numune Hastanesi, Klinik Mikrobiyoloji Laboratuvarı, Sivas, Türkiye
2Sivas Devlet Hastanesi, Moleküler Genetik, Sivas, Türkiye
3Cumhuriyet Üniversitesi Tıp Fakültesi, Tıbbi Mikrobiyoloji Anabilim Dalı, Sivas, Türkiye
Keywords: Human Papilloma Virüs, Sitoloji, Genotip, Human Papiloma Virus, Cytology, Genotype
6.548 görüntülenme 2.942 indirme
Gereç ve Yöntem: Çalışmamız, yaşları 21 ile 67 arasında değişmekte olan 140 kadın olgu üzerinde yapıldı. Hastalardan alınan servikal örneklerde PCR yöntemi ile HPV DNA araştırıldı ve Otomatize HybriMax cihazında revers hibridizasyon yöntemi ile HPV genotiplendirilmesi yapıldı. Ayrıca servikal fırça ile alınan smearlar lam üzerine yayıldı ve incelenmek üzere hastanemiz patoloji laboratuvarına gönderildi.
Bulgular: Çalışmamızda, olguların % 6,4'ünde HPV DNA pozitifliğine rastlandı. HPV genotip 6, % 25 oranında en sık bulunurken ikinci sıklıkta genotip 16, % 16,6 oranında rastlanmıştır. Bu hastaların patoloji negatifliği ve HPV pozitifliği % 77,8 oranındadır. Smear sonuçlarına göre smear negatif olan hastaların %94,7'sinde HPV negatif, %5,3'ünde pozitif bulunmuştur. Kondiloma aküuminatalı hastaların %33,3'ünde HPV negatif, %66,7'sinde HPV pozitiftir. Vajinal intraepitelyal neoplazi (VIN) tanısı konan hasta bir tane olup, HPV negatif olarak tespit edilmiştir.
Sonuç: Yöremizde tespit ettiğimiz HPV DNA pozitifliği yüksek bir orandadır. Sitolojik takibin yanında moleküler testler de takipte oldukça önemlidir. Moleküler çalışmalar, gelecekte ülkemizde rutin aşılama çalışmalarında kullanılacak genotiplerin önceliğini belirlemede yararlı olacaktır.
Materials and Methods: Our study was realised with 140 women who is between 21 and 67 years. HPV DNA was researched with PCR method in servical smears of patients and HPV genotyping was carried out with reverse hybridization procedure in HybriMax (Hybribio). Then, smears taken with servical brush were spreaded on slides and they were sent to pathology department for examining.
Results: In our study, % 6,4 of case have HPV positiveness. In our study, the most frequent genotype of HPV is HPV type 6 (%25). The second is HPV 16 (%16,6). The ratio for pathologic negativity and HPV positiveness is %77,8. It were detected that %94,7 of the patients with smear negative are HPV negative and %5,3 of them are HPV positive. %33,3 of the patients with condylomata accuminata are HPV negative, %66,7 of them are HPV positive. Patient diagnosed as VIN is only one and detected HPV negativity.
Conclusion: The degree of HPV DNA positivity which we detected in our region is high. In addition to cytologic evaluation, molecular techniques are also important for following the disease. Molecular works will be useful to determine the priority of genotypes that will be use for routine vaccination in our country, in future.
Giriş
Günümüzde moleküler teknoloji destekli epidemiyolojik çalışmalar HPV enfeksiyonlarının servikal kanser gelişimindeki ana rolünü kanıtlamıştır3. İki erken HPV geninin (E6 ve E7) tümör oluşumunda temel rol oynadıkları bilinmektedir. E6 geni p53 e bağlanır ve onun translokasyonunu önler. Böylelikle p53 ün hedef genleri etkilemesini inhibe eder4. HPV nin onkojenik tipleri ile enfeksiyon, servikal kanser ve onun prekürsörü neoplazilerde temel etyolojik faktördür5. Servikal kanser olgularının %90-99’unda örneklerden HPV DNA izole edilebilmektedir6. HPV tipleri invazif malignensilerle ilişkileri temelinde sınıflandırılmaktadır7.
Yüzden fazla HPV genotipi sınıflandırılmıştır ve tıbbi önemi olan anogenital kanserlerle ilişkili tipler alfa papilloma virus genusundandır. HPV 16, 18, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58 ve 59 insanlar için karsinojenik olarak sınıflandırılmıştır. HPV genotip 6 ve 11 insan karsinojenitesi açısından “sınıflandırılamayan” olarak adlandırılmışlardır8.
Hücresel immunitenin baskıda olduğu kişilerde HPV lezyonları daha yüksek oranlarda görülür. İmmün supresyon latent enfeksiyonların aktivasyonuna yol açar veya aktif enfeksiyonların reinokülasyonu söz konusu olur ve aşikar lezyonlar ortaya çıkar9. Bu çalışmada amacımız, bölgemizdeki genotiplerin sıklığını belirlemek, servikal sürüntü ile sonuçlar arasındaki ilişkiyi değerlendirmektir.
Materyal ve Metot
Aralık 2009 – Mart 2010 tarihleri arasında, Kadın Hastalıkları ve Doğum Kliniği’ne başvuran hastalardan rutin Pap smear ve HPV DNA için örnekler alındı. Servikal örnek numuneleri menstrüasyon döneminde olmayan, üç gün öncesine kadar vaginal tedavi uygulanmamış, test öncesinde vaginal asetik asit ve lugol solusyonu uygulanmamış, 24 saat içerisinde cinsel aktivitede bulunmamış olan hastalardan seçildi. Smearler servikal fırça (servibrush) ile alındı, lam üzerine yayıldı ve incelenmek üzere hastanemiz patoloji laboratuvarına gönderildi. Patoloji laboratuvarında hematoksilen+eozin boyası ile boyanıp Bethesda 2001 ve Pap Class sistemi ile değerlendirildi.
Hastalardan muayene esnasında servikal HPV DNA’nın saptanması için Female Swab Specimen Collection Kiti (HybriBio, HongKong ) kullanılarak sürüntü örnekleri alındı ve hastanemiz Mikrobiyoloji Laboratuvarı’na getirildi. HPV GenoArray Test Kiti (HybriBio, HongKong) ile genomik DNA izole edildi. Amplifikasyon için Hybribio PCR kiti kullanıldı. Otomatize HybriMax (HybriBio, HongKong) cihazıyla revers hibridizasyon yöntemi ile karsinojenik riskli (16, 18, 31, 35, 33, 39, 45, 51, 52,56, 58, 59, 68, 73, 82), sınıflandırılamayan riskli (6, 11, 40, 43, 44, 54, 61, 70, 72, 81) ve olası karsinojenik riskli (26, 53, 66) olan 21 HPV genotipi, biotin ve pozitif kontrolün olduğu HybrioMemHPV21 membran stripleri ile çalışma yapıldı.
Elde edilen sonuçların istatistiksel değerlendirmesi SPSS (Statistical Package for Social Sciences) Windows 15,0, Khi kare testi ve iki yüzde arasındaki farkın önemlilik testi kullanılarak yapıldı. Sonuçlar %95’lik güven aralığında, anlamlılık p≤0.05 düzeyinde değerlendirildi.
Bulgular
Karsinojenik riskli (16, 18, 31, 35, 33, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 68 73, 82), sınıflandırılamayan riskli (6, 11, 40, 43, 44, 54, 61, 70, 72, 81) ve olası karsinojenik riskli (26, 53, 66) 21 HPV genotipin araştırıldığı çalışmamızda, olguların %6,4’ünde HPV DNA pozitifliğine rastlandı.
Çalışmamızda HPV genotip 6 %25 oranıyla en fazla tespit edilirken, tip 16 %16,6, tip 18 % 8.35, tip 45 %8.35, tip 51 %8.35 (Şekil 1.) tip 56 %8.35, tip 59 %8.35, tip 58 %8.35, tip 66 %8.35, oranında görülmüştür. Sitolojik olarak normal hastalarda HPV DNA pozitiflik oranı %77,8’dir.
Şekil 1: HPV Negatif ve HPV Genotip51 Pozitif Test Membran Stripleri
Smear sonuçlarına göre smear negatif, HPV negatif hasta %94,7 iken, %5,3 hastada smear negatif, HPV pozitiftir. Kondilomata aküminatalı %33,3 hastada HPV negatif, %66,7’sinde HPV pozitiftir. Vaginal Intraepitelial Neoplazi tanısı alan hasta bir tane olup, HPV sonucu negatif olarak tespit edilmiştir.
Tablo 1’de olguların yaş ortalamaları ve cinsel aktivite süreleri, oral kontraseptif, sigara kullanımı, ortalama doğum sayıları ve kadın hastalığı öyküsü ile HPV pozitiflikleri arasındaki ilişki verilmiş olup istatistiksel olarak anlamlı bir farklılık bulunmamıştır (p>0.05).
Tablo 1: HPV ile yaş, kadın hastalığı öyküsü, sigara kullanımı, oral kontraseptif kullanımı, cinsel aktivite süresi, parite sayısı arasındaki dağılım
Tartışma
Kolombiya merkezli Latin Amerikalı kadınlar arasında yapılan bir çalışmada, normal servikal sitolojiliye sahip kadınlarda HPV oranı %14,5 ile %16,6 oranında tespit edilmiştir13.
Koyuncu14 tarafından 2006 yılında yapılan bir çalışmada normal sitoloji gösteren pap smearli kadınlarda HPV genotip dağılımı araştırılmış, %52,9 ile HPV genotip 16 birinci sırada bulunurken, HPV genotip 18 %29.14 ile ikinci sırada, daha sonra azalan sıklıklarla HPV genotip 52 ve 45 bildirilmiştir. Anormal sitolojili kadınlarda ise en sık HPV tipi olarak %52,9 ile HPV genotip 16 bulunmuş, sonra sırasıyla %22 ile HPV genotip 18, %11,8 ile HPV genotip 52 tespit edilmiştir.
Ergünay ve ark.15 2007 yılında yaptıkları karsinojenik riskli ve sınıflandırılamayan riskli genotiplerin sıklığı çalışmasında, HPV DNA tespit edilen hastaların 22’sinde (% 78,6) HPV 16, 18, 31, 45, 56, 59, olası risk taşıyan 2 hastada HPV genotip 53, (% 7,1) 4 hastada (%14,3) ise sınıflandırılamayan HPV 6, 54, 72, 81 genotipini tespit etmişlerdir.
ABD’de yapılan HPV prevalansının yaşlara göre değerlendirildiği bir çalışmada HPV prevalansı 14-19 yaş arası %24,5, 20-24 yaş arası %44,8, 25-29 yaş arası %27.4, 30-39 yaş arası %27.5, 40-49 yaş arası %25.2 ve 50-59 yaş arası %19.6 olarak bulunmuştur. Buna göre HPV prevalansının 20-24 yaş arasında en yüksek olduğu görülmektedir. Bu da cinsel aktivitenin en yoğun olduğu dönemle uyumlu olup 40 yaştan sonra belirgin bir şekilde azalmaktadır16. Bizim çalışmamızda HPV DNA pozitifliğinin yaş ile ilişkisi istatistiksel olarak anlamlı bulunmamıştır.
Rotell-Martins ve ark.17 Brezilya’da yaptıkları bir araştırmada karsinojenik riskli HPV tiplerinin prevalansının sigara kullananlarda kullanmayanlara göre belirgin derecede yüksek olduğunu bulmuşlardır. Sigara ve HPV infeksiyonu birlikteliğinin servikal intraepiteliyal neoplazi gelişiminde, birbirlerinin etkilerini arttırdığı düşünülmektedir18. Koyuncu14 ve Eren19 yaptıkları çalışmada oral kontraseptif kullanımı ile HPV enfeksiyonları arasında anlamlı bir ilişki bulamamışlardır.
Diane ve ark.’nın20 yaptıkları çalışmada da HPV ile oral kontraseptif kullanımı arasında anlamlı bir ilişki tespit edilmemiştir.
Çalışmamızda sigara kullanımı, oral kontraseptif kullanımı, cinsel ilişki süresi, kadın hastalığı öyküsü ve parite sayıları ile HPV pozitifliği arasındaki ilişki istatiksel olarak anlamlı bulunmamıştır.
Biyopsi sonuçlarına göre, kondiloma aküminatalı olgularımızda HPV DNA %2,1 (n=3) oranında pozitif bulunmuştur. HPVpozitif olarak tespit edilen hastaların birinde üç çeşit yüksek riskli HPV DNA (genotip 16, 56, 59) birlikte tespit edilirken diğer bir olguda düşük riskli HPV DNA genotip 6 tespit edilmiştir.
Yapılan çalışmalarda kondiloma aküminatanın daha çok Tip 6 ve 11 ile ilişkili olduğu gösterilmiş olup 42 olguluk bir derlemede, nüks oranı % 66, malign transformasyon oranı ise % 56 olarak bildirilmiştir21.
Yaptığımız smear testinde yüksek grade squamöz intraepitelyal lezyon (HSIL) ve düşük grade squamöz intraepitelyal lezyon (LSIL) olgusu tespit edilmezken, ASCUS pozitif olgularda da HPV DNA pozitifliğine rastlanmamıştır.
Karsinojenik riskli genotiplerin sıklığının bilinmesi, kalıcı HPV enfeksiyonlarının saptanması ve çeşitli yöntemlerle HPV DNA nın ve genotiplerinin belirlenmesi, servikal kanserlerin önlenmesinde, takip ve tedavilerinde oldukça önemlidir.
Sonuç olarak yöremizde tespit ettiğimiz HPV DNA pozitifliği ülkemiz verileri ile karşılaştırıldığında yüksek denilebilecek bir orandadır. Sitolojik takibin yanında moleküler testler de takipte oldukça önemlidir. Ayrıca belirlenen genotipler gelecekte ülkemizde de yapılması gereken rutin aşılama çalışmalarında kullanılacak genotiplerin önceliğini belirlemede yararlı olacaktır.
Kaynaklar
1)Munoz N, Castellsague X, de Gonzalez AB, Gissmann L.
2)Chapter 1: HPV in the etiology of human cancer. Vaccine
3)2006; 24: 1-10.
4)Trottier H, Burchell AN. Epidemiology of mucosal human
5)papillomavirus infection and associated diseases. Public
6)Health Genomics 2009; 12: 291-307.
7)Murray R. Klinik Mikrobiyoloji Çeviri Editörü Ahmet
8)Başustaoğlu, Atlas Kitapçılık, Ankara 2009; 1601.
9)Shaikh F, Sanehi P, Rawal R. Molecular screening of
10)compounds to the predicted Protein-Protein Interaction site of
11)Rb1-E7 with p53-E6 in HPV Bioinformation 2012 volume 8.
12)Guzm´an-Olea E, Berm´udez-Morales VH, Peralta-Zaragoza
13)O, Torres-Poveda K, Madrid-Marina V. Molecular mechanism
14)and potential targets for blocking HPV-Induced lesion
15)development. J Oncol 2012; 2012: 278312.
16)Mc Intyre P. Finding the viral link: the story of Harald zur.
17)Hausen Cancer World 2005; 32-37.
18)Kimple AJ, Torres AD, Yang RZ, Kimple RJ. HPVAssociated
19)head and neck cancer: molecular and nano-scale
20)markers for prognosis and therapeutic stratification. Sensors
21)2012; 12: 5159-69.
22)Bouvard V, Baan R, Straif K, et al. A review of human
23)carcinogens Part B: biological agents. Lancet Oncol 2009, 10:
24)321-2.
25)De Villiers EM, Fauquet C, Broker TR, Bernard H-U, Hausen
26)H. Classification of papillomaviruses. Virology 2004; 324:
27)17-27.
28)Rossi PG, Ricciardi A, Cohet C, et al. Epidemiology and
29)costs of cervical cancer screening and cervical dysplasia in
30)Italy. BMC Public Health 2009; 1186: 1471-2458-9-71.
31)Paola Massimi P, Banks L. Transformation assays for HPV
32)oncoproteins. Methods Mol Med 2008; 119: 381-95.
33)Saslow D, Solomon D, Lawson HW, et al. American cancer
34)society, american society for colposcopy and cervical pathology,
35)and american society for clinical pathology screening guidelines
36)for the prevention and early detection of cervical cancer.
37)Am J Clin Pathol 2012; 137: 516-42.
38)Perez G, Lazcano-ponce E, Hernandez-Avila M, et al. Safety
39)immunogenicity and efficacy of quadrivalent human papilomavirus
40)(type 6, 11, 16, 18) L1 virus-like particle vaccine in
41)Latin American women. Int J Cancer 2008; 122: 1311-8.
42)Koyuncu E. Taksim Eğitim ve Araştırma Hastanesi, Kadın
43)Hastalıkları ve Doğum Polikliniği’ne başvuran hastaların servikal
44)sitolojilerin servikal kanser risk faktörlerine göre analizi
45)normal ve anormal sitolojik sonuçlarda yüksek onkojenik HPV
46)prevalansı Uzmanlık Tezi. İstanbul 2006.
47)Ergunay K, Misirilioğlu M. Pinar F, Tuncer ZS, Tuncer S,
48)Ustaçelebi S. Human papillomavirüs DNA in cervical samples
49)with cytological abnormalities and typing of the virus. Mikrobiyol
50)Bült 2007; 41: 219-26.
51)Dunne EF, Unger ER, Stenberg M, et al. Prevalence of HPV
52)infection among females in the United States. JAMA 2007;
53)297: 813-9.
54)Rotell-Martins CM, Panetta K, Alves VA, Siqueira SA, Syjanen
55)KJ, DerchainSF. Cigarette smoking and high risk HPV
56)DNA as predisposing factors for highgrade cervical intraepithelial
57)neoplasia (CIN) in young Brazilian women. Acta Obstet
58)Gynecol Scand 1998; 77: 678-82.
59)Polat H, Yarkın F, Vardar MA, Serin MS, Köksal F. Servikal
60)kanserli kadınlarda Human papillomavirusu infeksiyonları ve
61)diğer risk faktörlerinin saptanması. İnfeksiyon Dergisi 1996;
62)10: 13-9.
63)Eren H. Serviksin prekanseröz lezyonlarındaki Humanpapillomavirüs
64)prevalansı. SB Göztepe Eğitim ve Araştırma hastanesi
65)uzmanlık tezi 2007; P: 17.
66)Diane M, Harper MD, Meghan R, et al. Factors affecting the
67)detection rate of human papillomavirus. Ann Fam Med 2003;
68)1: 221-7.
69)Chu QD, Vezeridis MP, Libbey, NP, Wanebo HJ. Giant
70)condyloma acuminatum (Buschke-Lowenstein tumor) of the
71)anorectal and perianal regions. Analysis of 42 cases. Dis Colon
72)Rectum 1994; 37: 950-7.
© 2013 Fırat Tıp Dergisi. Tüm hakları saklıdır.