Deneysel Diabetes Mellitusda GLUT 4 Proteininin İmmünoblotting Yöntemiyle Gösterilmesi
1Fırat Üniversitesi Tıp Fakültesi, İç Hastalıkları Anabilim Dalı, , ELAZIĞ
2Fırat Üniversitesi Fen Edebiyat Fakültesi, Biyoloji Anabilim Dalı,
3Fırat Üniversitesi Tıp Fakültesi, Fizyoloji Anabilim Dalı, ELAZIĞ
Anahtar Kelimeler: Diabetes mellitus, GLUT4, immünoblotting yöntemi, Diabetes mellitus, GLUT4, immunoblotting method
3,655 views
Gereç ve Yöntem: Wistar-Albino cinsi 30 adet rat temin edildi. Ratlar, kontrol (n=10) ve çalışma grubu (n=20) olmak üzere iki gruba ayrıldı. Çalışma grubuna 60 mg/kg tek doz Streptozotosin (STZ) intraperitoneal verildi ve diabet oluşturuldu. Ratların günlük kan şekerleri ölçüldü ve NPH insülinle tedavi edildiler. 10 hafta sonunda dekapite edildiler. Deneklerin arka bacaklarından kas örnekleri alındı. Bunlar homojenize edilerek süpernatant (Serbest proteinler) ve serbest olmayan proteinler (membran ve agregasyona uğrayan proteinler) elde edildi. Bu proteinlerden oluşan süspansiyonlara elektroforez işlemi uygulandı. Elektroforez işlemi sonunda elde edilen protein bantları daha sonra immünoblotting yöntemine tabi tutuldu ve GLUT 4 bandı görüntülendi.
Bulgular: Diabetik ratların plazma membran fraksiyonundan elde edilen protein örneğindeki GLUT 4 miktarının kontrollere göre daha az yoğunlukta olduğu görüldü. Hücre içi mikrozomal membran GLUT 4 protein miktarı değerlendirildiğinde diabetik ratlarda kontrollere göre GLUT 4 proteininde hafif bir yoğunluk azalması görüldü. Genel olarak ise diabetik ve kontrol gruplarının GLUT 4 miktarları arasında önemli bir farklılık olmadığı gözlendi.
Sonuç: İnsülin yetersizliği ve hiperglisemi, diabetik ratların kas dokusundaki glukoz transporter GLUT 4ün yoğunluğunu azaltmaktadır.
Meterial and Methods: Thirty Wistar-Albino rats were used in this study, the rats were divided into diabetic (n = 20) and control groups (n = 10). According to the daily blood glucose level, daily regular insulin was injected subcutaneously. Muscle samples were taken from the hind legs of the rats. After ten weeks, free and non-free proteins were obtained by homogenizing these samples, Electrophoresis was applied to solutions, which were formed from these proteins. The protein bands, which were obtained by electrophoresis, were exposed to immunoblotting method and the GLUT 4 band was imaged.
Results: In diabetic rats, it was demonstrated that the GLUT 4 protein, which was obtained from the plasma membrane fraction, had a less density than the control group. When the amount of intracellular microsomal membrane GLUT 4 protein was evaluated, a slight decrease was observed in the density of GLUT 4 protein in diabetic rats than the controls. Generally, the amounts of GLUT 4 in the diabetic and control groups were similar.
Conclusion: The insulin insufficiency and hyperglycemia decrease the translocation of GLUT 4 from microsomal membranes to the plasma membrane in the muscle tissue of diabetic rats.
© 2002 Fırat Tıp Dergisi. All rights reserved.